抗體抗原測定的Elisa方法

　　在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上，用于測定各種各樣的抗原、半抗原和抗體，Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡便、靈敏、快速的測定方法。那讓我們一起來看看抗體抗原測定的Elisa方法吧！

　　抗體抗原測定的Elisa方法一：直接法

　　1、將抗原吸附在固相載體表面；

　　2、添加一種封閉試劑，防止檢測抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合；

　　3、添加直接偶聯(lián)某種酶（如HRP）的檢測抗體。該檢測抗體將結(jié)合抗原，并且剩余的抗體會從孔中洗掉；

　　4、添加這種酶的底物；

　　5、短暫孵育后，在酶標(biāo)儀上測定每個孔的信號。

　　抗體抗原測定的Elisa方法二：間接法（測定抗體效價）

　　1、首先將過量的抗原加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的四孔中進行吸附，洗滌除去未吸附抗原；

　　2、將待測抗體（一抗）溶液加入反應(yīng)凹孔，溫育，形成抗原-抗體復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白；

　　3、加酶標(biāo)記抗抗體（二抗），溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物；

　　4、加入底物生成有色產(chǎn)物，加終止液終止酶促反應(yīng)，日測或用酶標(biāo)儀測定吸光值，計算第一抗體量。酶標(biāo)第二抗體是將第一抗體免疫另一種動物，將抗體純化再與酶交聯(lián)而成的。

　　抗體抗原測定的Elisa方法三：夾心法（測定抗原量）

　　1、將抗原免疫第一種動物獲得的特異性抗體的免疫球蛋白加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔中進行吸附，洗滌除去未吸附抗體；

　　2、將待測抗原溶液加入反應(yīng)凹孔，溫育形成抗原-抗體復(fù)合物、洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白；

　　3、再加抗原免疫第二種動物獲得的的特異性抗體，經(jīng)溫育形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，洗滌；

　　4、加入抗第二種動物抗體的酶標(biāo)記抗體，溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物；5、加底物生成有色產(chǎn)物，終止酶促反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測定吸光值，經(jīng)計算得到抗原量。

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