凱杰qiagen糞便DNA提取試劑盒51804實(shí)驗(yàn)步驟

一、凱杰qiagen糞便DNA提取試劑盒51804簡(jiǎn)介

QIAamp Power Fecal Pro DNA Kit在PowerFecal原有技術(shù)的基礎(chǔ)上，采用新型微球管和優(yōu)化的化學(xué)成分，可更高效地裂解細(xì)菌和真菌。抑制劑的去除已經(jīng)簡(jiǎn)化，使研究人員能夠更快地從糞便和腸道樣本中消除具有挑戰(zhàn)性的抑制劑。這導(dǎo)致總 DNA 通過(guò)在下游測(cè)試中觀察到的操作分類單元 （OTU） 揭示更高的 α 多樣性。采用簡(jiǎn)化的抑制劑去除技術(shù)（Inhibitor Removal Technology，IRT），在去除抑制劑方面效率高，同時(shí)還能縮短樣品處理時(shí)間。QIAamp PowerFecal Pro DNA試劑盒的A260/A280比值也最高，接近1.8，表明其不含抑制劑。使用QIAamp PowerFecal Pro DNA Kits處理的樣品之間的變異性也較小。與第一代QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit和其他市售試劑盒相比，使用QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit的研究人員可以從糞便樣本中鑒定出更大的細(xì)菌多樣性和OTU數(shù)。

二、凱杰qiagen糞便DNA提取試劑盒51804實(shí)驗(yàn)步驟

1.稱取200ul樣品在2ml的離心管中，離心管放在冰上。

2.每個(gè)樣品添加1mlInhibitEXBuffer,然后持續(xù)旋渦混合1min或者直到樣品混合均勻。

3.在70℃加熱懸浮液5min(難以溶解的細(xì)胞溶解溫度可以提高到95℃),然后旋渦混合15s。

4.離心樣品1min析出沉淀。

5.另取1.5ml離心管加15ulProteinaseK。

6.移取200ul步驟4的上清液至1.5ml含ProteinaseK的離心管中。

7.然后添加200ulBufferAL,旋渦混合15s。(注意：不要直接添加ProteinaseK到BufferAL中，樣品和BufferAL必須充分混合成均勻混合液)

8.70℃孵育10min。

9.添加200u1乙醇到溶解液中，旋渦混合。

10.小心移取600ul步驟9的裂解液到QIAamp旋轉(zhuǎn)柱中，蓋上蓋子，離心1min。

把QIAamp旋轉(zhuǎn)柱放到一個(gè)新的2ml的收集管中，丟掉含有濾液的管。11.小心打開QIAamp旋轉(zhuǎn)柱，添加500ulBufferAW1,離心1min。把QIAamp旋轉(zhuǎn)柱放到一個(gè)新的2ml收集管中，丟掉包含濾液的收集管。

12.小心打開QIAamp旋轉(zhuǎn)柱，添加500ulBufferAW2,離心3min,丟掉包含濾液的收集管。

13.把QIAamp旋轉(zhuǎn)柱放到一個(gè)新的2ml的收集管中，丟掉舊的含有濾液的收集管，離心3min。

14.把QIAamp旋轉(zhuǎn)柱放到一個(gè)新的1.5ml的離心管，直接移取200ulBufferATE

到QIAamp薄膜上。室溫孵育1min,然后離心1min洗提DNA。通過(guò)UV吸收度判斷DNA純度，使用BufferATE做空白設(shè)計(jì)避免結(jié)果錯(cuò)誤。

三、凱杰qiagen糞便DNA提取試劑盒51804注意事項(xiàng)

1.準(zhǔn)備好70℃水浴鍋。

2.所有的離心操作都在室溫下(15-25℃),14000轉(zhuǎn)/分鐘

3.用BufferAL和InhibitEXBuffer溶解任何沉淀都要加熱和混勻。

4.Buffer AW1和Buffer AW2都加乙醇。

5.使用之前混合所有緩沖液。

四、凱杰qiagen糞便DNA提取試劑盒51804規(guī)格表

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