三一造血CIK 細胞高效擴增試劑盒（CT-009）產品介紹

產品簡介：

細胞因子誘導殺傷性細胞（CIK 細胞）是一個異質細胞群，包含 CD3+CD56+NK 樣 T 細胞和CD3+CD8+細胞毒性殺傷作用 T 細胞，具有殺傷腫瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特點， CIK 細胞對各種腫瘤尤其是對低表達 MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本試劑盒可以從單個核細胞（MNC）在體外高效擴增成 CIK 細胞，為免疫學研究提供了一個有力工具。

產品特點：

· 成份明確，無異源成份

· 無菌，無支原體，低內毒素

· 同時適用于膠血與外周血

· 14天培養后，細胞活率在90%以上wan全無血清培養，使用更安全

· 殺傷活力強，主要成分為NK樣T細胞及細胞毒性T細胞

操作方法：

一、血漿的提取與保存

1.將取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 離心管中，室溫下 650g，離心 15min；

2.取上層黃色血漿部分于新的 50mL 離心管中（下層為血液細胞成分，用于后續單個核細胞的提取）；

3.將血漿置于 56°C 水浴鍋中滅活 30min；

4.血漿滅活完畢后，可見血漿呈現渾濁狀，900g，離心 10min；

5.取上清，于 4°C 保存待用。

二、單個核細胞的提取

1.取血漿提取步驟的下層紅色細胞沉淀，加入生理鹽水或 PBS 至原體積；

2.取 2 支 50mL 離心管，分別加入 15mL 淋巴細胞分離液，并將 1 步驟中的稀釋血液分別緩緩鋪加到淋巴細胞分離液的上層；

3.室溫下，800g 離心 20min（升速 1-5，無閘減速）；

4.離心后，離心管中樣品由上到下分為 4 層：血漿層-白膜層-人淋巴細胞分離液層-紅細胞與粒細胞的沉淀。分別小心吸取白膜層及其以下約一半的液體于新的離心管中，并加入生理鹽水或PBS 至 40mL 體積，混勻，300g 離心 10min；

5.棄上清，沉淀再次用 40mL 的生理鹽水或 PBS 重懸，300g 離心 10min；

6.棄上清，沉淀用少許 CIK 細胞無血清培養基重懸，合并，取部分細胞懸液計數，備用。

三、單個核細胞接種與補液

1.第0天，配制50mL CIK 細胞wan全培養基：CIK 細胞無血清培養基 45mL，10%已熱滅活的自體血漿（5mL），CIK-I 100μL，CIK-II 100μL 以及終濃度為 1000IU/mL 的 IL-2。將制備好的單個核細胞（MNC）按 1.5M cells/mL 的細胞密度接種于 50mL 已配制好的 CIK 細胞wan全培養基中，混合均勻后轉移至 T75 瓶中，而后將 T75 瓶轉移至 5%二氧化碳培養箱 37°C 培養；

2.第 3 天（3×24h），補加 CIK 細胞無血清培養基 95mL，5%已熱滅活的自體血漿（5mL）以及 IL-2（IL-2 終濃度為 1000IU/mL），轉入細胞培養袋，此時培養袋含 150mL 培養基；

3.第 5 天，補加 CIK 細胞無血清培養基 150mL，1%已熱滅活的自體血漿 1.5mL 以及 IL-2（IL-2終濃度為 1000IU/mL），此時袋子含 300mL 培養液；

4.第 7 天，補加 CIK 細胞無血清培養基 300mL，剩余的所有自體熱滅活血漿以及 IL-2（IL-2 終濃度為 1000IU/mL），然后分成兩袋，此時每個袋子約含 300mL 培養液；

5.第 9 天，分別往每個培養袋補加 CIK 細胞無血清培養基 300mL 以及 IL-2（IL-2 終濃度為1000IU/mL），此時每個袋子約含 600mL 培養液；

6.第 11 天，分別往每個培養袋補加剩余 CIK 細胞無血清培養基以及 IL-2（IL-2 終濃度為1000IU/mL），此時每個袋子約含 1000mL 培養液；

7.第 13-14 天，收獲 CIK 細胞。

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