如何選擇熒光定量PCR中的對照？

對照的目的是對檢測的各個環(huán)節(jié)進行監(jiān)控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。那么我們應(yīng)該如何選擇熒光定量PCR中的對照呢？讓我們一起來看看吧！

一、陽性對照和陰性對照

陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。

二、擴增對照

我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準確的定義應(yīng)該是擴增陽性對照和擴增陰性對照。擴增陽性對照含有陽性擴增模板，擴增陰性對照應(yīng)含有陰性擴增模板（基質(zhì)核酸）。擴增對照只能監(jiān)控每次擴增過程中的擴增系統(tǒng)是否正常，不能監(jiān)控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢測RNA樣品的檢測試劑盒，其擴增陽性對照使用質(zhì)粒，便無法監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄過程。

三、內(nèi)標（Internal Control，IC）

內(nèi)標是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴增的一段非靶序列分子。內(nèi)標有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標，另一種是人工添加的內(nèi)標。內(nèi)標的最大特點是與靶序列共同擴增，而其他的對照都是獨立擴增。

四、核酸提取對照

可以使用內(nèi)參基因，假病毒混合基質(zhì)，滅活病毒混合基質(zhì)來監(jiān)控提取到擴增的流程。

五、反轉(zhuǎn)錄對照（RT control）

可以使用提取好的RNA內(nèi)參基因，RNA假病毒混合基質(zhì)，滅活RNA病毒混合基質(zhì)來監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄到擴增的流程。

無反轉(zhuǎn)錄對照（no-RT control）含有除反轉(zhuǎn)錄酶以外的所有成分。

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