NEB T4 DNA連接酶(Ligase)介紹

NEB T4 DNA連接酶(Ligase)將連接以下底物：

NEB T4 DNA連接酶(Ligase)的特性和用法：

濃度：400000個內(nèi)聚端基單位/ml和2000000個內(nèi)聚端基單位/ml

反應(yīng)條件：1X T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液；在16°C條件下培養(yǎng)。

1X T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液：50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM ATP、10 mM DTT(pH 7.5 @ 25°C)。

貯存溶液：10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% Glycerol（pH 7.4 @ 25°C）。

熱失活：65℃10min。

NEB T4 DNA連接酶(Ligase)的應(yīng)用特性：

★ 限制性片段的克隆

★ 將連接體和適配器連接到鈍端DNA

NEB T4 DNA連接酶(Ligase)使用時的注意事項(xiàng)：

（1）ATP 是反應(yīng)中必不ke少的輔因子。這與需要 NAD 作為輔因子的 E. coli DNA 連接酶不同。

（2）若需稀釋 T4 DNA 連接酶，推薦使用含 50% 甘油的貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001S）稀釋，然后于 -20℃ 貯存。如稀釋后立即使用，也可以使用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。

（3）連接反應(yīng)可以在添加 1 mM ATP 的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液的任何一種或在 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）緩沖液中進(jìn)行。

（4）為方便起見，連接可在室溫（20 - 25℃）條件下進(jìn)行。連接粘性末端，在 20 µl 反應(yīng)體系中加入 1 µl T4 DNA 連接酶，反應(yīng) 10 分鐘。連接平末端，在 20 µl 的反應(yīng)體系中加入 1 µl 的 T4 DNA 連接酶，反應(yīng) 2 小時；或者加入 1 µl 高濃度的 T4 DNA 連接酶反應(yīng) 10 分鐘。此外，也可選擇 NEB Quick Ligation 快速連接試劑盒（#M2200S）[30 次反應(yīng)] 或（#M2200L）[150 次反應(yīng)]），在室溫條件下反應(yīng) 5 分鐘，即可完成 DNA 平末端和粘性末端的連接。

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