預活化層析填料介紹

色譜填料又稱層析介質，指填充在色譜柱中具有納米孔道結構的微球材料，粒徑一般在微米尺度，納米孔道的孔徑大小在5-200 nm范圍內。色譜填料的形貌、結構、粒徑大小和分布、孔徑大小和分布、基質及表面功能基團等都影響著色譜填料的性能，其中基質影響著色譜填料的各種物理性能，比如機械強度、載量等，表面功能基團則影響著分離模式和分離選擇性，即色譜填料的使用方向。色譜填料根據分離模式可分為預活化層析填料、凝膠過濾層析填料、疏水層析填料、離子交換層析填料、親和層析填料和多模式層析填料等。

預活化層析填料可以偶聯一個特定的配基，制備成一個可以純化一種或者幾種目標分子的親和填料。例如，可以使用抗體、抗原、酶、受體、小的核酸或者多肽作為配基，純化能與它們結合的相應的配體。

BioToolomics開發了多種預活化層析填料，可以高效、快速、簡便、安全地偶聯各種功能配體。預活化填料的基質是由瓊脂糖制成的，具有親水性強、非特異性吸附低的特點，并且基質已被高度交聯，具有很高的機械強度。

制備預活化親和層析柱的注意要點：

（一）配基的選擇

通常情況下，當配基分子量＜5 KDa時，需要間隔臂；對于大分子配基，間隔臂不是必須的選擇條件。例如，NHS活化瓊脂糖層析填料有一個長間隔臂（11個原子），特別有助于固定結構受限的配體。而CNBr則沒有間隔臂，對于小分子配基（＜5KDa），當配基和樣品結合的時候，由于CNBr沒有間隔臂，可能會由于空間位阻而影響結合。因此當配基分子量＜5 KDa時，建議使用NHS活化配基填料。對于大于5KDa的配基，二者差異不大。

（二）偶聯方法的選擇

配基是通過其功能基團的反應偶聯到基質上，所以偶聯方法的選擇取決于配基的特性。NHS、羧基、CNBr、醛基活化瓊脂糖填料通過配基的伯胺基團進行偶聯，這幾種最主要的區別是NHS和羧基含有間隔臂，而CNBr和醛基沒有間隔臂，此外，NHS和羧基能耐受較高的pH值。環氧活化瓊脂糖填料可通過與羥基形成的穩定醚鍵固定糖和其他碳水化合物，它們也可用于偶聯含伯胺或含硫醇的分子。肼活化瓊脂糖層析填料通過形成穩定的腙鍵偶聯含醛或酮的配體。

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