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          當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章抗體的“存“和“取“

          抗體的“存“和“取“

          更新時(shí)間:2022-05-16點(diǎn)擊次數(shù):2766

          一、抗體的簡(jiǎn)介
          抗體是一些淋巴細(xì)胞直接抵抗外來(lái)分子所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),它們是免疫系統(tǒng)的重要組成成分,是實(shí)驗(yàn)室的重要工具。抗體有兩個(gè)成員:多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是用抗原注射動(dòng)物產(chǎn)生的,針對(duì)相同蛋白質(zhì)的不同抗原決定簇直接產(chǎn)生的各種不同親和性的多種免疫球蛋白的混合物。單克隆抗體是在體外制備的,是免疫淋巴瘤細(xì)胞與分泌抗體的漿細(xì)胞融合后產(chǎn)生的,整個(gè)培養(yǎng)只產(chǎn)生一種抗體(常是IgG) ,直接抵抗外來(lái)物。
          二、抗體的作用

          抗體可以用放射性元素或者酶來(lái)標(biāo)記,可以讓它們所識(shí)別的蛋白質(zhì)變成可見(jiàn)的或者是可以定量的。
          1)染色細(xì)胞:標(biāo)記抗體可以用來(lái)定位細(xì)胞蛋白質(zhì)。
          2)免疫沉淀:抗體可以用來(lái)檢測(cè)抗原是否存在以及其功能。

          表一  免疫化學(xué)技術(shù)、多克隆抗體和單克隆抗體

          技術(shù)

          多克隆抗體

          單克隆抗體

          共聚單克隆抗體

          細(xì)胞染色
          免疫共沉淀
          免疫印跡
          免疫親和純化

          一般好
          一般好
          一般好

          抗體依賴(lài)
          抗體依賴(lài)
          抗體依賴(lài)
          抗體依賴(lài)

          很好
          很好
          很好

          免疫方法




          標(biāo)記抗體
          標(biāo)記抗原

          困難
          一般好


          抗體依賴(lài)

          很好
          很好

          3)免疫印跡:就是我們所知道的免疫印跡法,蛋白質(zhì)是否存在以及數(shù)量都可以在濾膜上通過(guò)樣品的免疫來(lái)檢測(cè)出。
          4)免疫親和:抗體所針對(duì)的蛋白質(zhì)可以直接被分離和純化。
          三、抗體的貯藏

          1)抗體最好貯藏在-20℃分裝,凍融對(duì)于大多數(shù)抗體都不好。

          2)分裝好的抗體可以在4℃保存至少6個(gè)月。

          3)加上疊氮鈉至終濃度0.02%來(lái)阻止細(xì)菌的生長(zhǎng)。

          四、注意事項(xiàng)

          1)要知道你的抗體是由什么動(dòng)物產(chǎn)生的,方便后續(xù)決定用什么樣的二抗。多克隆抗體通常用兔或者猴子,單克隆抗體通常用小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠。
          2)使用前離心去除所有的沉淀,在一些操作中可以阻止高背景。
          3)A蛋白,從S. aureus 細(xì)胞壁中分離到的42 kDa的多肽;G 蛋白,從β溶血鏈球菌中分離到的30-35 kDa 的多肽,都與抗體有強(qiáng)烈的結(jié)合,它們被用來(lái)免疫沉淀或者定位抗體。A蛋自和G蛋白都可以用來(lái)與珠子結(jié)合或者標(biāo)記,適用于大部分的抗體亞類(lèi)。

           


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